【Przeznaczenie】

Zestaw jest sondą TaqMan w czasie rzeczywistym fluorescencyjnym PCR do jakościowego wykrywania ORF1ab, kwasu nukleinowego genów N 2019-nCoV w wymazie z gardła, plwocinie u pacjentów z podejrzeniem objawów zapalenia płuc i przypadków klastrowania.

Wyniki testu służą wyłącznie do celów klinicznych i nie mogą być traktowane jako jedyny punkt odniesienia dla diagnozy klinicznej. Zaleca się przeprowadzenie jawnej analizy dotyczącej objawów klinicznych i innych wyników laboratoryjnych.

Operatorzy powinni mieć doświadczenie w profesjonalnym przeszkoleniu w zakresie amplifikacji genów lub testowania metod biologii molekularnej oraz posiadać odpowiednie kwalifikacje do wykonywania czynności laboratoryjnych. Laboratorium powinno posiadać rozsądne środki bezpieczeństwa biologicznego i procedury ochronne.

【Zasada testu】

W tym zestawie startery i sondy są zaprojektowane odpowiednio do konserwatywnych i specyficznych regionów ORF1ab, N 2019-nCoV. Fluorescencyjny PCR służy do wykrywania wirusowego RNA po oczyszczeniu próbki RNA z kwasu nukleinowego.

Ten zestaw testowy wykorzystuje technologię fluorescencyjnej PCR w czasie rzeczywistym. Podczas amplifikacji PCR sonda wiąże się z matrycą, a grupa reporterowa sondy na końcu 5' jest rozszczepiana przez enzym Taq (aktywność egzonukleazy 5'→3'), tym samym odejście od grupy wygaszającej w celu wygenerowania sygnału fluorescencyjnego. Krzywa amplifikacji w czasie rzeczywistym jest automatycznie wykreślana na podstawie wykrytego sygnału fluorescencji i obliczana jest wartość Ct próbki (liczba cykli doświadczanych, gdy sygnał fluorescencji w każdej probówce reakcyjnej osiąga ustalony próg). Do oznaczenia sond genu ORF1ab i genu N w roztworze reakcyjnym wykorzystuje się fluorofory FAM, VIC i Texas red. Za pomocą jednego testu można jednocześnie przeprowadzić jakościowe wykrywanie powyższych dwóch genów 2019-nCoV.

Aby uniknąć wyniku fałszywie ujemnego, zestaw jest dostarczany z kontrolą wewnętrzną (IC), która jest oznaczona grupą fluorescencyjną Cy5, która może być wykorzystana do monitorowania procedury ekstrakcji i roztworu reakcyjnego.

【Główne składniki】

Notatka¹: Różne partie komponentów nie podlegają wymianie.

Notatka²:Zestaw testowy nie zawiera odczynnika do ekstrakcji kwasu nukleinowego, przed użyciem należy go przygotować.

1. Obsługa próbek

Aby przeprowadzić ekstrakcję kwasu nukleinowego, dodaj odpowiednio 10 μl kontroli wewnętrznej do 200 μl kontroli dodatniej i kontroli ujemnej.

2. Przygotowanie odczynników:

Przygotowanie systemu: weź wstępnie zainstalowany liofilizator do amplifikacji kwasu nukleinowego, uzyskany przez otwarcie foliowego woreczka i natychmiast go odwiruj. Ilość próbki w każdym teście powinna być wielokrotnością liczby 8 zawierającej jedną kontrolę dodatnią i jedną kontrolę ujemną.Do każdej probówki reakcyjnej dodać 35 μl wody wolnej od nukleaz.

3. Ładowanie próbki:

Dodaj 5 μl próbki kwasu nukleinowego do przetestowania, kontrolę pozytywną, kontrolę negatywną, że cała objętość reakcji wynosi 40 μl w przydzielonym roztworze reakcyjnym. ponieważ nie wymaga to drobnej mieszaniny i po prostu zamknij pokrywkę probówki reakcyjnej PCR, odwiruj płyn w ściance probówki na dnie probówki, w ten sposób przetwarzając amplifikację PCR.

Po weryfikacji szacuje się, że dodanie 5 μl-10 μl oleju parafinowego w systemie PCR nie wpłynie na wynik PCR, ale pozwoli uniknąć zanieczyszczenia i parowania cieczy.